功能完整性:保留表面活性物質(zhì)(二棕櫚酰卵磷脂)分泌能力,完-美模擬體內(nèi)肺泡生理功能
高純度保障:經(jīng)SP-C(肺泡表面活性蛋白C)免疫熒光鑒定,純度≥90%,附完整質(zhì)檢報(bào)告
無(wú)菌保障體系:通過(guò)14天微生物全項(xiàng)檢測(cè)(支原體/細(xì)菌/真菌),HIV-1/HBV/HCV陰性認(rèn)證
組織特異性:精準(zhǔn)分離自肺泡區(qū)域,完整保留Ⅱ型細(xì)胞特征性結(jié)構(gòu)(嗜鋨性板層小體)
細(xì)胞形態(tài)與功能
典型立方形或圓形上皮細(xì)胞樣結(jié)構(gòu),頂端突入肺泡腔
胞質(zhì)內(nèi)富含嗜鋨性板層小體(直徑0.1-1.0 μm),內(nèi)含平行排列的板層狀磷脂結(jié)構(gòu)
分泌表面活性物質(zhì),降低肺泡表面張力(維持呼氣時(shí)肺泡開(kāi)放,吸氣時(shí)防止過(guò)度膨脹)
增殖與傳代
可傳代1-2代,建議接種密度為3×10? cells/cm2
具有分化為Ⅰ型肺泡細(xì)胞的潛能,可用于肺損傷修復(fù)研究
冷凍保存
程序降溫+含DMSO保護(hù)液的標(biāo)準(zhǔn)化流程,解凍后細(xì)胞活力≥80%
雙酶定向消化技術(shù)
膠原酶Ⅰ(200U/mL)+ 中性蛋白酶(0.1%)聯(lián)合處理
37℃振蕩消化25min,精準(zhǔn)分離肺泡上皮層
差速貼壁法去除成纖維細(xì)胞污染(貼壁時(shí)間差20min)
七維質(zhì)檢體系
形態(tài)學(xué)鑒定:倒置顯微鏡觀察典型Ⅱ型細(xì)胞特征(泡沫狀胞質(zhì)、板層小體)
表面標(biāo)記檢測(cè):SP-C/Prospero轉(zhuǎn)錄因子(SP-C是Ⅱ型細(xì)胞特異性標(biāo)記)
功能驗(yàn)證:嗜鋨性板層小體電鏡觀察及表面活性物質(zhì)分泌檢測(cè)
微生物檢測(cè):PCR+培養(yǎng)法雙重驗(yàn)證無(wú)菌狀態(tài)
活力檢測(cè):臺(tái)盼藍(lán)排除法確保細(xì)胞活性
遺傳穩(wěn)定性:STR基因型分析排除交叉污染
交叉污染檢測(cè):ISO認(rèn)證細(xì)胞庫(kù)比對(duì)確認(rèn)種屬特異性
肺疾病模型構(gòu)建
肺纖維化模型(TGF-β1誘導(dǎo))
急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)模型(LPS刺激)
表面活性物質(zhì)功能障礙相關(guān)疾病(如新生兒呼吸窘迫綜合征)
藥物開(kāi)發(fā)與毒性測(cè)試
表面活性物質(zhì)替代療法藥物篩選
肺泡上皮屏障通透性改變相關(guān)藥物評(píng)價(jià)
納米顆粒肺部沉積與毒性研究
再生醫(yī)學(xué)研究
肺損傷修復(fù)機(jī)制探究(Ⅱ型細(xì)胞向Ⅰ型細(xì)胞分化)
干細(xì)胞分化為肺泡上皮細(xì)胞的誘導(dǎo)體系優(yōu)化
專用培養(yǎng)基CM-M003
基礎(chǔ)成分:DMEM/F12 + 5%優(yōu)質(zhì)FBS(低內(nèi)毒素)
生長(zhǎng)因子:KGF(角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子,10ng/mL)+ EGF(5ng/mL)
保護(hù)添加劑:谷氨酰胺(2mM)+ 抗氧化劑(0.5mM)
特殊添加物:1% ITS(胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒)
培養(yǎng)建議
包被處理:鼠尾膠原Ⅰ(2-5 μg/cm2)預(yù)處理培養(yǎng)器皿
換液策略:初始48h靜置培養(yǎng),之后每2天半量換液
傳代時(shí)機(jī):當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)70-80%時(shí),用0.25%胰酶(含EDTA)消化